測量核酸樣品濃度時,大都是用比爾定律的原理測量,利用光穿透樣品溶液時,光的吸收度(A,或是光學密度Optical Density,OD)與吸收係數(α)、光徑長(l)、 濃度(c)三者均呈正比:A=αlc。由於吸收係數(α)與物質相關、光徑長(l)會固定,因此我們可以很簡單的藉由測量吸收度換算出樣品濃度。在標準計算是中光徑長是1公分。

  傳統使用Cuvette時光徑都是1公分;現今常使用超微量分光光度計,都是靠大幅縮小光徑來達到超微量測量的目的,在此使用的光徑通常都低於0.5公厘,有些儀器會藉由更進一步的縮短光徑以減少測量體積,但是這樣做會有什麼風險呢?以0.5mm為例,OD換算濃度需要再多乘以20 ( 10mm / 0.5mm ),若此時光徑有誤差,1%的誤差會放大成20%,是非常需要注意的

  目前的微量光譜分析儀,光徑走向多為垂直(圖一),上樣後儀器會將上下蓋拉出適當的間隙測量,或是變更光徑測量;BioDrop超微量光譜分析儀是市面上唯一水平光徑的超微量光譜分析儀(圖二),測量前後光徑固定。在測量上樣前我們可以明確的看到樣品是否在適當的位子,而不是在測量時才能觀察。

圖一:傳統『垂直式』微量光譜分析儀測量過程

  上樣完成後,蓋子會下壓,拉起水柱並上拉到一定高度後測量(圖一-2),或是下壓創造更低的光徑。下壓的過程是由儀器控制,需要多種組件才能達到此效果。

圖二:『水平光徑』的超微量光譜分析儀

  上樣區沒有移動裝置,樣品滴在樣品槽中間即可測量, 測量前可以明確的看出樣品是否在正確的位子上,若沒有可以馬上調整。

結論:

  垂直式光徑設計,測量光徑容易失準,需要定期重新校準。別讓失準的光徑在不知不覺中影響您寶貴的實驗。

Why BioDrop?

  1. BioDrop使用彩色觸控式螢幕操作,開機進入操作模式只需5秒,使用更加便捷、快速。
  2. BioDrop系列儀器可由190-1100 nm進行完整全光譜掃描,且波長範圍、準確度及再現性皆為業界最高。
  3. BioDrop DUO具兩種測量樣品功能:A.  一般cuvette樣品槽B.  超微量樣品槽。可精確測量樣本體積達0.5 μL。
  4. BioDrop超微量樣品槽使用水平式固定光徑技術,分注完待測樣品可立即測讀。不需連結上部光徑,亦無須作光徑校正。
  5. 儀器操作程式可進行DNA、RNA、oligo、Protein濃度測量;內建的Dye labeling軟體,可直接測量換算濃度。多項蛋白質濃度測定功能提供選擇(UV、Lowry、Bradford、Biuret及BCA);並可計算核酸Tm值。
  6. 可經由USB傳輸介面存取資料,或加裝熱感式印表機直接印出。
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