【高效能的Competent cell勝任細胞】，是cloning技術基本要領。專利技術讓Competent cell揚名全世界。一分鐘就做完Transformation。讓cloning更容易 @ 太鼎生物科技/太鼎食安科技

高效能Competent cell勝任細胞

具備有高效能的Competent cell勝任細胞，是cloning技術基本要領。ECOS專利技術讓Competent cell揚名全世界。其高效能的能力，讓cloning更容易，在一分鐘就做完Transformation。依據其應用及菌種細分如下。

上圖一為ECOS 9 -5C ompetent cell勝任細胞 (strain: JM109)

配合TA cloing kit, 或是快速ligation kit, 6分鐘完成transformation

讓cloning變得更容易

下圖二為ECOS 101 C ompetent cell勝任細胞 (strain: DH5a)全世界最常見也是最普遍的strain, 其適用於大片段的plasmid DNA Cloning或Yeast two hybrid system，其plasmid DNA片段可大於10~40Kb。

下圖三為ECOS 21 C ompetent cell勝任細胞 (strain: BL21) BL21適用於生產大量的Protein蛋白質表現。BL21，這個菌株主要是帶有一個lac promoter，在promoter之後則有T7 RNA polymerase的基因，整個白質表達還需要質體上帶有T7 promoter，使用時加入IPTG用以啟動lacpromoter使T7 RNA polymerase產生，之後就可以啟動質體上的T7 promoter。這個菌株對於protein表達比較好的原因在於，因為一般的菌表達過量的蛋白質之後，形成stress，甚至protein本身對菌株就有毒性，這些原因會造成protein產量下降，可是使用DE3系統，可以控制在最佳生長狀況下，進行誘導protein產生，以提高protein的產量與效率，最高可以得到在總蛋白質中，具有50%的產量。

【一分鐘完成Transformation示意圖】

【ECOS產品系列Competent cell勝任細胞注意事項】

1.本建議濃度以新鮮配製之抗生素為準。

2.使用過期之抗生素，將因藥性不足，易產生假性轉形菌落。

3.若使用過量的抗生素濃度或同時使用多種抗生素進行篩選，轉形效率會明顯下降。請務必依建議濃度進行抗生素篩選

【ECOSTM轉形之正對照組操作步驟】

每組ECOSTM皆附5 μl 10-4 μg/μl pUC19作為正對照組之轉形質體。

請將pUC19質體濃度稀釋為10-6-10-7μg/μl，取1 μl 10-6-10-7μg/μl pUC19

進行ECOSTM之轉形，並以含20 μg/ml Ampicillin之LB培養基進行篩選。

【轉形效率之計算】

轉形效率指每1 μg質體DNA經由轉形後，勝任細胞形成的菌落數。例：

10-6 μg pUC19經由轉形後，勝任細胞形成的100個菌落，則轉形效率為100/10-6 =1x108 (cfu/μg)。

【藍/白篩選】

進行ECOSTM轉形前，請先確認質體帶有LacZ operon。轉形後，請將ECOSTM勝任細胞塗佈於含0.5 mM IPTG 和 40~60 μg/ml X-gal之LB培養基。37oC培養後，白色菌落表示外源DNA嵌入LacZ operon，藍色菌落則仍具備正常的β-galactosidase代謝能力。