【太鼎生物科技有限公司02-86609496】Biovision台灣代理-MPO Fluorometric activity assay kit, #k745-100骨髓過氧化酶(Myeloperoxidase)


 



 


新的心血管疾病危險因子:骨髓過氧化酶


骨髓過氧化酶(Myeloperoxidase)簡稱為MPO,主要存在嗜中性球的嗜天青(azurophilic)顆粒及單核球的溶質體(lysosome)中。MPO在體內的功能,是利用其具有過氧化的能力,製造出含毒性的自由基,而將入侵的細菌或者黴菌消滅掉。早期MPO 的臨床運用主要使用在血液抹片染色,用以作為急性白血病的分類。而近年來的研究發現,因為體內長期的發炎反應所誘發的MPO 表現,會造成脂質的過氧化,進而形成粥狀動脈硬化及心血管疾病,因此成為新的,有力的預測心血管疾病的危險因子。


Kit Summary:
• Detection method- Fluorescence (Ex/Em = 485/525 nm)
• Sample type- Cell and Tissue culture supernatants, urine, plasma and serum, as well as many other biological fluids etc.
• Species reactivity- Mammalian


Features & Benefits:
• Simple procedure
• Fast and convenient
• Sensitive assays for measuring MPO as low as 0.5 μU per well


Kit Components:
• Assay Buffer
• MPO Substrate Stock
• MPO Probe
• Fluorescein Standard ( 1 mM )
• MPO Positive Control


Description:
Myeloperoxidase (MPO) is a peroxidase enzyme (EC 1.11.1 .7) most abundantly present in neutrophil granulocytes. It is a green hemoprotein found in neutrophils and monocytes that catalyzes the reaction of hydrogen peroxide and halide ions to form cytotoxic acids and other intermediates that play a role in the oxygen-dependent killing of tumor cells and microorganisms. Its heme pigment causes the green color in secretions rich in neutrophils, such as pus and some forms of mucus. Furthermore, it can oxidize tyrosine to a tyrosyl radical using hydrogen peroxide as an oxidizing agent. In BioVision’s MPO Assay Kit, MPO catalyzes the production of NaClO from Hâ‚‚Oâ‚‚ and NaCl. Subsequently, NaClO will react stoichiometrically with Aminophenyl fluorescein (APF) to generate fluorescein, which has a strong fluorescence and can be detected at Ex/Em = 485/525 nm. The kit provides a rapid, simple, sensitive, and reliable test suitable as a high throughput assay of MPO activity. This kit can be used to detect MPO activity as low as 0.5 μU per well


Storage Conditions:
-20°C


 


更多資料引用: http://www.labmed.org.tw/UpFiles/magazineA/PDF/%E9%AA%A8%E9%AB%93%E9%81%8E%E6%B0%A7%E5%8C%96.pdf


 


骨髓過氧化酶(MPO)1941 年被分離出來,是含有血質基(heme)的過氧化酶,分子量為150 kDaMPO 是由骨髓系細胞在骨髓分化成成熟細胞時製造出來的,主要儲存在成熟的嗜中性球的第一級顆粒(primary granules)中,也有少量存在於單核球中及一些組織的巨噬細胞中,最主要功能是負責第一線的免疫防禦。當有細菌侵犯人體時,嗜中性球會吞噬細菌,將細菌包入吞噬體(phagosome)中,並進行活化及去顆粒,此時MPO 會由第一級


顆粒釋放至吞噬體及細胞外(Winterbourn C.C2000) 。同時活化的吞噬細胞會發生所謂的"呼吸爆發(respiratory burst",基本上是藉由NADPH 氧化酶將氧分子氧化成超氧自由基(O2_),O2_只要一形成就會被超氧化物岐化酶(SOD)轉化成過氧化氫(H2O2),而MPO就會在氯化物離子(chloride ions)的存在下,將H2O2 作用轉化成次氯酸(hypochlorous acidHOCl)HOCl 是由吞噬細胞所形成的最毒且最具有活性的自由基,它的殺菌力是過氧化氫的50 倍。MPO 除了主要催化產生次氯酸(HOCl),也會在酪胺酸(L-Tyrosine)及亞硝酸離


(NO2-)的存在下產生酪胺酸自由基(Tyrosyl radical),及亞硝酸自由基(nitrite radiacal)等活性的氧化劑(reactive oxidant) 。這些氧化劑可以有效殺死入侵細菌,因此傳統上測量MPO的量可代表白血球的活化程度。(Zhang R, 2002; Shishehbor2003)


MPO 其毒性作用的對象不只是微生物,還包括正常細胞或腫瘤細胞。最近幾年醫學界發現,如果血管內壁發生慢性發炎,內皮細胞會分泌白血球趨化物質及表現黏附分子,而吸引血流中的單核細胞進入血管內層(intima),進入內層的單核細胞會演化成巨噬細胞,而不斷分泌MPOMPO 所產生的活性氧化劑又會造成血漿低密度脂蛋白(low-density lipoproteins)中的多元不飽和脂肪酸的過氧化反應(peroxidation)( Panasenko O.M1994),而產生氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)。這些oxLDL 會被巨噬細胞上的清道夫脂蛋白受體(scavenger receptor)吸附而被吞噬進細胞內,而形成泡沫細胞(foam cell)。不斷累積的泡沫細胞就會形成脂肪斑(plaque),進而衍生為動脈粥狀硬化。窄化的血管壁會使血流不順造成心肌的缺氧及壞死,病人常在劇烈運動後發生心絞痛的現象(stable angina),如果脂肪斑不穩定(unstable angina)或破裂,就會造成血栓而使血流供應中斷,就會產生致命的心血管疾病( acute myocardial infraction)


MPO 在整個心血管疾病發展中都佔有重要的地位。最直接的證據是在粥狀硬化的組織切片染色中,可找到大量的MPO 表現(Daugherty A, 1994),及MPO 所產生的特有的脂質過氧化產物,如HPETEs (hydroperoxy-eicosatetraenoic acids)F2-isoprostanesHPODEs(hydroperoxy-octadecadienoic acids )等。Zhang R.等人在2002 年發表在 JBC 的研究中,使用已去除MPO 基因的老鼠,誘使其產生腹膜炎,結果發現這些有發炎反應的老鼠血液F2-isoprostanes 的含量比一般正常老鼠降低85%,其他脂質過氧化產物也減少至少50%


這間接證明MPO 是造成脂質過氧化的主要酵素。MPO 所產生的活性氧化物除了會對脂質產生過氧化,同時也會攻擊蛋白質中的酪胺酸(Tyrosine),而形成氯化酪胺酸(Cl-tyrosine) (Hazell L.J1996),雙酪胺酸 (di-tyrosine)及亞硝酸酪胺酸(NO2-tyrosine)等副產物,這些會導致蛋白質的變性,使其漸漸地喪失功能


(Heinecke JW,.2002) 。在2004 Zheng L.等人更進一步證實高密度脂蛋白(HDL)上的ApoA-I 蛋白,就會被MPO 所產生的氧化物所攻擊而不能進行正常的功能。同時由於MPO 會消耗一氧化氮(NO),而一氧化氮有舒張血管壁及抑制血小板凝集的功能,因而MPO 的表現會造成血管內皮細胞的功能障礙,引起血管的損傷,進一步誘發並加速動脈硬化的形成。


Vita JA 等人也利用超音波測量臂動脈血管舒張的能力,發表一篇研究,結果顯示,MPO濃度位於最高四分位(Quartile)的人,其血管內皮細胞功能障礙的機率,是MPO 濃度位於最低四分位的人的6 (Vita JA2004) 。過多且毒性很強的自由基及次氯酸 (30-50 μmol/L),會造成局部組織的氧化損傷,促進血管內皮細胞的自然死亡(apoptosis)而脫落,此現象易造成脂肪斑的鬆動,另一方面次氯酸也會刺激組織因子(tissue factor)的大量表現而啟動凝血機制,促進血栓形成


 


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