T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent 是一種高效性抗退色試劑,可使用於免疫螢光染色樣品之觀察。此一高效性抗退色試劑可幫助螢光樣品抵抗於螢光顯微鏡下觀察時所產生之光漂白現象。


本產品之使用能適用於各種螢光染劑或抗體。並且使用本產品不但能使螢光樣品之觀察時間增長進而增加實驗成功率更可增加樣品保存期限至最多1星期。 


 


特性:


使用前請將“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent 回溫至室溫。


在使用“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent 前請盡量去除樣品上殘留之液體。


• “T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent 適用於大多數樣品於差異干擾差、相位差或螢光顯微鏡下觀察。


 


操作:


1.回溫試劑:


“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent ”4oC 冰箱中取出並回溫至室溫備用。請勿將“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent ”以溫水或其他加熱方式回溫,以免破壞產品穩定性。


2.使用Apply T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent


在使用“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent ”前請將樣品玻片上之殘留液體以拭鏡紙由玻片邊緣輕輕去除並在玻片上滴上一滴“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent ”10-20ul)。將樣品蓋玻片以45度角,緩慢的蓋在含有“T-Pro Mounting Reagent or T-Pro Mounting Long Reagent ”之載玻片上,其間請避免氣泡之產生。 


3.上機前準備


樣品玻片完成步驟二之製備後,請避光保存於4oC冰箱中並請注意保存時表面之平坦。保存期限則因樣品的不同而有所差異,自數小時至隔夜不等,同時也受到儲存環境中溫濕度的影響。如需較長時間保存,建議將樣品玻片以指甲油封片,並避光保存於4oC冰箱中。必要時,保存盒內可放置乾燥劑以維持儲存環境之乾燥。


 



1. T-Pro Mounting Long Reagent I 有幫助螢光分子抵抗光漂白之效果。圖1.a NIH 3T3細胞以4%福馬林固定後再以Fluorescein-phalloidin對細胞骨架進行染色。 圖中影像乃是將染色完成之樣品置於T-Pro Mounting Long Reagent IPBS中,並在封片後以100瓦汞燈對樣品進行不同時間之照射以產生光漂白之效果,再以63x/1.4 NA 油鏡及16-bit 單色 CCD攝影機在相同條件下進行拍攝。在所得影像中可清楚得知於PBS對照組中,在螢光照射120秒以後,絕大部分之螢光分子因光漂白而無法呈色,而在實驗組中發現T-Pro Mounting Long Reagent I能幫助螢光分子抵抗光漂白,直至螢光照射7分鐘後,大部分之螢光分子才因光漂白而無法呈色,因此說明了T-Pro Mounting Long Reagent I有幫助螢光分子抵抗光漂白之效果。並將兩組實驗在不同時間所取得之影像,以軟體對螢光衰減率進行分析後所做之圖。


 



下圖、以T-Pro Mounting Long Reagent I with DAPIAlexa Fluo 488 phalloidinAlexa Fluo 594 wheat germ agglutininNIH 3T3細胞進行染色之成果。





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