膠體金(colloidal gold)是一種常用的標記技術。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用膠體金來進行標記。同時廣泛應用於流式分析、電鏡、免疫、分子生物學以至生物晶片中。 @ 太鼎生物科技/太鼎食安科技

膠體金(colloidal gold)是一種常用的標記技術。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用膠體金來進行標記。同時廣泛應用於流式分析、電鏡、免疫、分子生物學以至生物晶片中。

奈米金抗體標誌, 相關資料來源: http://tw.myblog.yahoo.com/taiding2000/article?mid=579&prev=615&next=576&l=f&fid=19

〔膠體金特性〕

1．膠體金之肉眼呈色為何？

膠體金（colloidal gold），是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬於多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。最小的膠體金（2～5nm）是橙色的，中等大小的膠體金（10～20nm）是酒紅色的，較大顆粒的膠體金（30～80nm）則是紫紅色的。根據這一特點，用肉眼觀察膠體金的顏色可粗略估計金顆粒的大小。Innova biosciences提供40nm直徑之奈米金，其在肉眼呈色為粉紅至紫色。

2．膠體金於流式細胞儀的標記

膠體金可以明顯地改變紅鐳射散射角，因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。其光吸收性膠體金在可見光範圍內有一單一光吸收峰，這個光吸收峰的波長（λmax）在510～550nm範圍內，隨膠體金顆粒大小而變化，大顆粒膠體金的λmax偏向長波長，反之，小顆粒膠體金的λmax則偏於短波長。Innova biosciences 提供之InnovaCoat, 其光吸收峰為520nm～540nm。

〔膠體金應用〕

膠體金作為標記物用於免疫組織化學始於1971年,Faulk等應用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌,此後他們把膠體金與多種蛋白質結合.1974年Romano等將膠體金標記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發現了膠體金標記物在光鏡水準的應用。膠體金在免疫化學中的這種應用，又被稱為免疫金．之後，許多學者進一步證實膠體金能穩定又迅速地吸附蛋白質，而蛋白質的生物活性無明顯改變．它可以作為探針進行細胞表面和細胞內多糖、蛋白質、多胜肽、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位。此方法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高，既可用於抗原檢測，也可用於抗體檢測。

１、膠體金在電鏡水準的應用

膠體金應用電鏡水準的研究最早，發展最快，應用最廣泛。其最大優點是可以通過應用不同大小的顆粒或結合酶標進行雙重或多重標記。

膠體金用於電鏡水準的研究，主要包括：①細胞懸液或單層培養中細胞表面抗原的觀察。②單層培養中細胞內抗原的檢測。③組織抗原的檢測。

膠體金標記在電鏡水準的應用，主要方法包括：包埋前染色、包埋後染色、免疫負染色、雙標記技術和原位雜交技術等。

實驗證明，該法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高，既可用於抗原檢測，也可用於抗體檢測診斷。

２、膠體金在光鏡水準的應用
膠體金同樣可用做光鏡水準的標記物，取代傳統的螢光素、酶等。各種細胞塗片、切片均可應用。主要用於：①用單克窿抗體或抗血清檢測細胞懸液或培養的單層細胞的膜表面抗原。②檢測培養的單層細胞胞內抗原，③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。
膠體金用於光鏡水準的研究，可以彌補其他標記物不可避免的本底過高和內部酶活性干擾等缺點。

３、膠體金在流式細胞儀中的應用：
應用螢光素標記的抗體，通過流式細胞儀計數分析細胞表面抗原，是免疫學研究中的重要技術之一。但由於不同螢光素的光譜相互重疊，區分不同的標記困難，因此必須尋找一種非螢光素標記物，用於流式細胞計數。這樣可以同時進行幾種標記。該標記物必須能夠改變散射角，膠體金可以明顯地改變紅鐳射散射角，因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。

４、凝集試驗：單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液，其顏色隨溶膠顆粒大小而變化，當與相應抗原或抗體發生專一性反應後出現凝聚，溶膠顆粒極度增大，光散射隨之發生變化，顆粒也會沉降，溶液的顏色變淡甚至變成無色，這一原理可定性或定量地應用於免疫反應。

５、免疫印跡技術(immunoblotting)：免疫印跡是一種較新的免疫化學技術。用聚丙烯醯胺凝膠電泳將蛋白質分離，得到的區帶轉移至硝酸纖維素膜，然後用酶免疫法（或免疫螢光、ＲＩＡ）進行定量。
免疫膠體金也可用於該法的定量。轉移後的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫後，再與經葡萄球菌Ａ蛋白致敏的膠體金溫育，徹底洗去多餘的膠體金，根據膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。
利用金顆粒可催化銀離子還原成金屬銀這一原理，採用銀顯影劑增強金顆粒的可見性，更可大大提高測定靈敏度，檢測下限可低至 0.1ng，這種免疫金銀染色法應用已日趨廣泛。
由於膠體金免疫印跡技術簡便、快速，且有相當的高的靈敏度，在臨床免疫診斷上有很大的應用潛力。

６、膠體金在肉眼水準的應用
膠體金取代傳統三大標記物，用於肉眼水準的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點外，還有以下優點：①試劑和樣本用量極小，樣本量可低至1～2ul；②不需γ－計數器、螢光顯微鏡、酶標檢測儀等貴重儀器，更適於現場應用； ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質參與；④實驗結果可以長期保存；⑤時間大大縮短，提高了檢測速度。金標過程中，無共價鍵形成，是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質都可被金標記，標記後大分子物質活性不發生改變。實驗結果表明，膠體金的敏感性可達到 ELISA的水準。而結合銀染色時，檢測的敏感性更大大提高。