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【基因型鑑定產品問與答】最簡單gDNA萃取方法DirectPCR Lysis Reagent (mouse tail) Cat# 101-T( 50m l包裝), Cat#102-T( 100m l包裝)

不須有機溶劑Phenol/Chloroform純化，加熱完後的溶液可以直接PCR，進行genotyping分析。

原廠資料: www.viagenbiotech.com

產品品名: DirectPCR Lysis Reagent (mouse tail)

產品貨號: Cat# 101-T( 50m l包裝), Cat#102-T( 100m l包裝)

【產品問與答】傳統尾巴gDNA萃取, 都須經由Phenol/Chloroform萃取步驟, 或者市售genomic DNA Purification套組 (通過column等繁瑣步驟),來純化genomic DNA, 為何VIAGEN BIOTECH公司出售的產品, 可以一個步驟完成反應?

傳統萃取 “尾巴gDNA”，無法直接PCR；因組織內含有PCR反應抑制因子，抑制PCR反應。所以須經由有機溶劑Phenol/Chloroform萃取或kit萃取gDNA。“專利研發” DirectPCR Lysis Reagents具有抑制PCR抑制物的反應，不須考量PCR抑制問題。VIAGEN BIOTECH公司專門以DirectPCR Lysis Reagent銷售為事業， 其公司研發、生產、銷售。品質穩定，是分析Genotyping的最佳方法。

【產品問與答】VIAGEN BIOTECH產品如何分類?

VIAGEN BIOTECH將產品分為四種，視客戶需求可選擇不同產品: 其分類有尾巴genomic DNA萃取、細胞genomic DNA萃取、耳朵genomic DNA萃取、卵黃囊genomic DNA萃取。分有50ml及100ml包裝。

【產品問與答】genomic DNA沒有經由萃取步驟,不知genomic DNA品質如何?genomic DNA的穩定性如何?

VIAGEN BIOTECH專門為genomic DNA萃取而設計， 尾巴經由DirectPCR Lysis Reagent後, 其在4度C保存1星期，仍然維持不變的效能。長期貯存可以放在-20度C, 維持1年品質都不會改變。

【產品問與答】尾巴經由DirectPCR Lysis Reagent後，如何純化Crude lysates進行下游分析?

DNA in crude lysates can be rescued for further analysis. Add NaCl to a final concentration of 250mM , and then add 0.7 volume of isopropanol. DNA will form precipitates. Centrifuge at 4°C for 2 min, discard supernatant, wash DNA with 1 ml 70% EtOH, and dissolve DNA in 50 μl 10 mM Tris-HCl (8.0). Use 1 μl for PCR.

【產品問與答】尾巴經由DirectPCR Lysis Reagent萃取，在溶液中需要添加Proteinase K嗎?

在尾巴進行lysis reagent萃取前，需要在lysis reagent中先加加入25~50ul的Proteinase K, 其最終濃度為 0.2 -0.4 m g/ml (stock solution, 20m g/ml)。在lysis reagent反應之後，以95度c, 或是85度c, 45分鐘的條件中止Proteinase K的活性，避免Tag受到Proteinase K之反應。

【產品問與答】尾巴的長度不同，添加的DirectPCR Lysis Reagent也不同，反應的體積有最低限制嗎?

若是尾巴長度0.5公分 ，添加DirectPCR Lysis Reagent， 200ul~300ul。取Crude lysate 0.5ul~1ul進行PCR反應；若是尾巴長度0.4公分 ，添加DirectPCR Lysis Reagent， １50ul~250ul。取Crude lysate 0.5ul~1ul進行PCR反應；若是尾巴長度0.2~ 0.3公分，添加DirectPCR Lysis Reagent， 150ul~200ul，並稀釋2倍體積。取Crude lysate 1ul~2ul進行PCR反應。

【產品問與答】尾巴Genomic DNA經由 DirectPCR Lysis Reagent Release後，需要選擇那種品牌的DNA polymerase嗎?

不須要特定的Tag進行反應。常見的Tag, 例如Eppendorf Hotmaster Taq Polymerase (cat# 954-14-5018), Sigma JumpStart Taq DNA Polymerase (cat# D9307), or Qiagen HotStar Taq DNA polymerase (cat# 203203)都是可以進行反應的。

【產品問與答】如何加速DirectPCR Lysis Reagent 反應?

Rotating hybridization oven performs better than rocking plate. Use 0.75 cm tubes for less than 200 μl of DirectPCR Reagent. DNA fragmentation by prolonged rotation will not influence significantly PCR performance. Use roughly proportional volume of DirectPCR Lysis Reagent for different sized samples.