1. PerkinElmer
市面上大部份ECL的等級是nanogram,PerkinElmer Lightning plus靈敏度為1-10 picogram,包裝規格如下: 170mlx4 特價~7000元 (~10元/ml)
Western Blot Chemiluminescence Reagent Plus
(~10元/ml)
目錄號碼 |
包裝 |
可使用面積 |
NEL104 |
2 x 170 ml |
2,500 cm2 membrane |
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NEL105 |
4 x170 ml |
5,000 cm2 membrane |
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2. Pierce
SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate
靈敏度為picogram 250mlx2 特價~7000元 (~14元/ml) 第二件半價 (~10元/ml)SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate
(~10~14元/ml)
T-PRO新一代高靈敏度冷光試劑ECL
(一) fetagram ECL,靈敏度接近fg (靈敏度接近millipore ECL)
200mlx2 特價3500元
(一) Picogram ECL,靈敏度接近pg (靈敏度高於Pierce ECL, 與PerkinElmer )
200mlx2 特價2500元
(~6.25元/ml)-->picogram等級
【太鼎生物科技有限公司02-86609496】
(~8.75元/ml)-->fetogram等級
T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K001S
400ml特價2500
T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit, 貨號#JT96-K002S 400ml特價3500
冷光試劑介紹:
T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 為一方便用於偵測直接或間接帶有HRP的Western blotting,Southern 或 Northern化學發光之試劑套組。在有過氧化氫存在的情形下,Horseradish peroxidase (HRP)會催化環狀二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)的氧化,像是發光胺(luminol)。氧化當下,發光胺(luminol)的中間產物處於激發態,此產物藉由發光的方式衰退為基態。強化劑可增強發光的能量。利用此方法可以藉由直接或間接標定有HRP的抗體/鏈親和素(streptavidin)進而偵測特殊抗原或是核酸序列。
操作流程:
1. 將T-Pro LumiFast Chemiluminescence Detection Kit & T-Pro LumiFast Plus Chemiluminescence Detection Kit 中的試劑A及試劑B等體積混合至足夠蓋過membrane的使用量(平均用量最少為0.1ml/cm2)。於室溫使此混合試劑均勻混合作用1-2分鐘。
2. 將membrane上過量的緩衝液倒掉,但要保持轉漬膜的濕潤。加入步驟1混合好的試劑於轉漬膜上,在室溫下作用1-2分鐘。
3. 將步驟2過多的混合試劑倒掉,且將轉漬膜置於兩層保鮮膜中間或用兩片透明塑膠片密封,注意不可以有氣泡,並將轉漬膜吸附蛋白正面朝上,同時轉漬膜請勿過濕。
4. 將步驟3轉漬膜置入底片夾中。置入底片,要避光或是使用紅光。曝光約30至90秒。
5. 置入新的底片前,請先將原先片夾中的底片取出,並將底片放入顯影劑中。
6. 第二張底片的曝光時間可依據第一張的時間做調整。
7. 如果訊號過強,可在加入呈色劑15~30分鐘後再進行壓片,或作其他時間的調整。
注意事項:
1. 轉漬膜在接上一級抗體後須保持濕潤,不能乾掉。
2. 請在壓片前再配製化學發光試劑,配製量足夠覆蓋轉漬膜即可,勿將使用過混合試劑重複或混合使用。
3. 請使用乾淨微量吸管(Tip)並單一取用每種試劑,勿重複多次試用避免污染。
4. 除了取用底片、壓片曝光及洗片處理外,其他步驟可不必在暗室中操作。
5. 壓片後轉漬膜可經由T-Pro Western Blot Stripping Reagent (JB11-K002) 洗去原有抗體後,重複再次使用。
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