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  高速免疫染色装置 Western Q^® の特徴

1. Immunostaining by Western Q Circulated Pulse Method (Standard Protocol)The following data are immunostaining of western blotting using various antibodies as primary antibodies. Two times
dilution series of total protein from 10mg to 0.625mg derived from IGF-1 stimulated (50ng/ml, 5minutes) mouse cultured cell, P19, was blotted on PVDF membrane. Shaking in antibody solution was conducted for traditional method, and Circulated Pulse Method was conducted for Western Q. Same concentrations of antibodies (recommendedby manufacturers) were used for traditional shaking method and for Western Q Circulated Pulse Method. A) β-Actin (C4) (Santa Cruz) 1/3000 dilution Traditional Method: 4 hours Western Q Circulated PulseMethod: 40minutes exposure: 40 seconds exposure: 40 seconds
Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody1hour, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 4 hoursWestern Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 40minutes
Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500 dilutionECL (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film
B) Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) (E10) Mouse mAb（Cell Signaling） 1/2000 dilution
4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer
Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q CirculatedPulse Method: 40 minutes exposure 2.5 minutes exposure 10 minutes
Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody16 hours, Secondary antibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total18 hours Western Q Standard Protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 15minutes, Secondary antibody 15minutes,Washing 5 minutes, Total 40minutes
Secondary antibody: Polyclonal goat anti-mouse immunoglobulins/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film C) Phospho-Akt (Ser473) (Cell Signaling) 1/1000 dilution 4℃ overnight reaction is recommended by the manufacturer Traditional Method: Primary antibody 16 hours Western Q Circulated Pulse Method: 85 minutes
exposure: 5 minutes exposure: 15 minutes Traditional Method: Blocking 1hour (5% skim milk), Primary antibody 16 hours ( 4℃ ), Secondaryantibody 1hour, Washing total 60 minutes, Total 18 hours
Western Q modified protocol: Blocking 5 minutes (0.5% skim milk), Primary antibody 60 minutes, Secondary antibody 15minutes, Washing 5 minutes, Total 85minutes Secondary antibody: Polyclonal swine anti-rabbit IgG/HRP (Dako), 1/7500dilution ECL Plus (GE Healthcare) was used for chemiluminescence reaction. Exposed on X ray film
Reaction speed by Western Q (Circulated Pulse Method) is several todozen times higher than one by traditional shaking method.
☞ Protocol adjustment such as increasing time or raising concentration may be necessary for immunostaining which requires overnight reaction by traditional method because of antibodies or samples

簡単操作 ４０分 標準プロトコール（循環パルス法）で４０分の操作で免疫染色が完了します。抗体濃度・プロトコールによっては３０分程度に短縮可能です。振とうでオーバーナイトが必要な抗体では、４０分以上かかることがあります。 用途に合わせた２種類のプロトコール 高感度ハイクオリティを実現する「循環パルス法」と、複数の抗体反応を簡易的に行うための「インキュベーション法」の２種類の基本プロトコールを準備しました。 ハイクオリティな結果 循環パルス法では最適化されたフローコントロールにより、高い定量性・再現性・感度を実現します。  →  詳細は データシート をご参照ください。 抗体濃度の最適化不要 抗体濃度は基本的に従来法と同様で結構です。多くの場合、抗体メーカーの推奨濃度で反応できます。 必要な溶液量はワイドゲル（140×80mm）15ml、ミニゲル（80×80mm）8ml 、80×40mmでは4mlとなります。 ゲルに合わせたコンパクトボディ 狭いスペースでも利用でき、移動も楽に行えます。
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ご利用者の感想 もご覧いただけます。
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and  Datasheet on Western Q
従来法と同等以上のイメージ / 高い定量性・再現性・感度         従来法     240 分   Western Q 循環パルス法(A) 40 分   Western Q 循環パルス法(B) 40 分 lane1～5： ヒト培養細胞由来全タンパクを10μgから0.625μgまで2倍希釈系列をブロッティング ブロッキング： 従来法は5%スキムミルク、Western Q 循環パルス法は0.5%スキムミルク使用 一次抗体： Mouse monoclonal β-Actin (C4) （Santa Cruz）、1/3000希釈 二次抗体： Polyclonal goat anti-mouse immunogloblins/HRP (Dako)、1/7500希釈 ECL（GE Healthcare）で反応させた後、X線フィルムに40秒間露光    　同じ条件での比較 Western Q 循環パルス法はA, B 2回の反復実験    Western Q® を用いた高速免疫染色の原理 Western Q を用いた方法では、抗体溶液をメンブレンの微細孔内部に継続的に流し通過させることにより抗原と抗体の会合を促進します。さらにパルスフローにより分子の安定的な結合を促進し、短時間で高いシグナル強度を実現します。ポンプにより溶液を循環させるため一定量の抗体溶液で抗原抗体反応を効率よく行うことが可能になりました。   　循環パルス法を用いた標準操作 メンブレンをセットし、メンブレンカバーを重ね合わせます。     ブロッキング溶液 8ml をメンブレン上に満たし、5 分間循環させた後、排出。     一次抗体溶液を 8ml メンブレン上に満たし、15 分間パルスフローで循環させた後、排出。     二次抗体溶液 8ml を加え、15分間パルスフローで循環させた後、排出。 洗浄ユニットをセットし、洗浄溶液を 100ml 加え、すぐ排出。（約5分） メンブレンを取り出し、軽く洗浄溶液で濯ぎ、化学発光試薬で検出。     簡単操作、４０分！    Western Q® 仕様
	型式 WTQ101 （ミニゲル対応） WTQ102 （ワイドゲル対応） 外形寸法（チューブ固定具装着時） 150(W)×150(D)×157(H) mm 190(W)×150(D)×157(H) mm 重量 1.6 kg 1.7 kg 最大メンブレンサイズ 90×90 mm 140×90 mm 必要抗体溶液量 8ml （90×90mmメンブレン） 15ml （140×90mmメンブレン） ポンプ速度 5～40ml/分